Los fibroblastos producen y mantienen la homeostasis de la matriz extracelular en condiciones fisiológicas y desempeñan un papel fundamental en condiciones patológicas como la fibrosis pulmonar. Existen evidencias de que la población de fibroblastos es heterogénea y diferentes moléculas como por ejemplo la -actina de músculo liso diferencian algunas subpoblaciones. Dentro de estas diferencias destaca la expresión o ausencia del receptor Thy-1, una glucoproteína que se ha sugerido que funciona como molécula de adhesión y que modula las vías de señalización celular a través de su anclaje con GPI. El papel de Thy-1 en la expresión de moléculas asociadas con la matriz extracelular no se conoce con precisión y los estudios que existen son escasos y han arrojado resultados contradictorios. Por ejemplo, se ha sugerido que la expresión de Thy-1 identifica a una subpoblación de fibroblastos con propiedades profibrogénicas como la colágena intersticial mientras que se ha reportado que los ratones KO de Thy-1 presentan una fibrosis pulmonar mucho más severa. Sin embargo, es importante destacar que a la fecha no existen estudios que examinen el comportamiento de estas diferentes subpoblaciones de fibroblastos pulmonares humanos (Thy-1+ y Thy-1-) en otras funciones fundamentales en el desarrollo de la fibrosis pulmonar, en particular en su capacidad de migración y proliferación, así como en la expresión de metaloproteasas de matríz (MMPs) y sus inhibidores tisulares (TIMPs), moléculas fundamentales en la remodelación de la matriz extracelular. En este contexto el objetivo de este estudio es examinar el efecto de la expresión de Thy-1 en el comportamiento de fibroblastos pulmonares humanos con respecto a su capacidad de migración, proliferación y expresión de MMPs y TIMPs. Para tal efecto se aislarán y cultivarán fibroblastos pulmonares humanos y se analizará la presencia de Thy-1 por citometría de flujo. Posteriormente se realizarán ensayos de migración en cámara de Boyden y por la capacidad de reparar una herida in vitro. Asimismo, se estudiará la tasa de crecimiento con el reactivo de proliferación celular WST-1. Se determinará por RT-PCR en tiempo real, Western Blot y Bioplex la expresión de MMP1, MMP2 y MMP9 así como de TIMP-1, TIMP-2 y TIMP-3. Adicionalmente, la actividad de MMP2 y MMP9 se analizará por zimografía. Finalmente se corroborarán los estudis anteriores en fibroblastos Thy-1- transfectados con el gen y en fibroblastos Thy-1+ a los cuales se abatirá la expresión del gen con RNA de interferencia.

Contribución del Proyecto Los resultados de este proyecto permitirán conocer mejor el efecto de la expresión de un receptor poco estudiado hasta la fecha (THY-1) sob los fibroblastos pulmonares humanos. Este conocimiento contribuirá a entender parte de los mecanismos involucrados en el desarrollo de la fibrosis pulmonar, proceso generalmente progresivo, irreversible y letal. Asimismo, contribuirá a entender mejor la heterogeneidad de los fibroblastos pulmonares actores centrales en la fisiología pulmonar y en los padecimientos fibrosantes. Por otro lado, está investigación permitirá la formación de un Doctor en Ciencias Biomédicas y redituará en la publicación de por lo menos un artículo en una revista indizada de alto impacto.