Las neumonías, a nivel mundial, son consideradas la principal causa de muerte en ovinos y bovinos, ocasionando importantes pérdidas económicas en la industria del ganado1. La Mannheimiosis es de carácter multifactorial e involucra una combinación de etiologías, tales como estrés, factores ambientales y agentes infecciosos (sinergismo virus-bacteria). La principal etiología de carácter bacteriano, involucrada en el proceso y responsable de la pleurobronconeumonía fibrinosa es Mannheimia haemolytica. Ésta es un cocobacilo Gram-negativo, donde el serotipo A1 y A2, son los principalmente asociados a neumonía en bovinos y ovinos respectivamente. M. haemolytica es una bacteria Gram-negativa productora de microvesículas de membrana externa (MVs), durante cualquiera de sus fases de crecimiento normal. Durante su formación, las MVs engloban una gran cantidad de componentes del periplasma. Estos componentes, en su mayoría, son considerados importantes factores de virulencia y resistencia de las bacterias invasoras en las fases iniciales de la infección, concentrándose sobre el tejido del hospedador. El hecho de que las MVs transporten ciertas enzimas degradativas para la pared celular del huésped, permite que la bacteria desarrolle su propio microambiente para así colonizar e invadir. El principal papel que juegan las MVs de las bacterias Gram (-), es formar nichos, en los tejidos blancos del huésped, acarreando y transmitiendo factores de virulencia a modulando las respuestas de defensa del hospedador, permitiendo así que la bacteria completa se establezca y posteriormente colonicé. Por la participación que tienen las MVs en tan diversos aspectos entre la interacción hospedador-patógeno, son consideradas potentes factores de virulencia bacteriana. El principal objetivo del presente trabajo es evaluar la respuesta inmomoduladora de las Microvesículas (MVs) de Mannheimia haemolytica A2, local en el aparato respiratorio y sistémico en ovinos. Para tal efecto se inmunizarán 15 corderos en condiciones de campo, con un inmunógeno elaborado a base de MVs y administrado por vía intranasal e intramuscular. Se realizarán aislamientos bacterianos antes y al final de la inmunización, para correlacionarlos con el título de anticuerpos sistémicos y locales inducidos por la inmunización. De esta manera se evaluará la respuesta inmune humoral, para posteriormente correlacionarla con la respuesta inmune innata, desarrollada a partir de la obtención de monocitos y linfocitos B (MN) de sangre periférica de los animales inmunizados previamente con las MVs de M. haemolytica. Se montaran cultivos celulares de ambos tipos celulares y en el caso de los monocitos sanguíneos se someterán a diferenciación celular a Células Dendríticas (CD) mediante Kits específicos para tal efecto. Una vez obtenidas las CD junto con los linfocitos B, se les someterán a la presencia de 300 y 400 µg de MVs, para evaluar la producción de Interleucina-12 (IL12) que nos indica activación celular, la cual se detectará mediante ELISA de Sándwich y RT-PCR. Paralelamente se determinará como parte de la diferenciación de la CD y por exposición a MVs bacterianas, la expresión de moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad de clase II (CMH-II) mediante detección de anticuerpos, así como de receptores tipo Toll-4(RT-PCR). De esta manera, podremos correlacionar la actividad inmunomoduladora de las MVs de M. haemolytica que inducen en el sistema inmune innato con la respuesta inmune humoral cuando éstas son utilizadas como biológicos acelulares en ovinos.

El proyecto pretende completar la evaluación de un inmunógeno elaborado a base de_x000D_ microvesículas (MVs) bacterianas de Mannheimia haemolytica A2, el cual se encuentra en tramite de patente. Dicho inmunógeno se ha evaluado a nivel experimental, principalmente en ovinos. Sabemos que el biológico induce una adecuada respuesta inmune humoral en los animales, protegiendo a éstos del desarrollo de lesiones cuando se les desafió experimentalmente con una cepa serotipo A2 patógena de campo. Así mismo, los animales vacunados en condiciones de campo, resultaron obtener altos niveles de IgA a nivel de mucosa nasal, y de IgG en sangre, cuando se les inmunizó por vía nasal e intramuscular respectivamente. Comparando con un grupo de animales vacunados con un biológico comercial y animales que no recibieron tratamiento alguno. Estos hallazgos sustentan de manera muy sólida, que las Microvesículas de M. haemolytica A2, son excelentes inmunógenos y que despiertan una adecuada respuesta inmune humoral. Sin embargo, no hemos establecido el papel inmunomodulador que juegan dichas estructuras en al interaccionar con la inmunidad innata y mucho menos su correlación con la inmunidad adaptativa. Esta investigación, generará información sólida, de el papel que juegan las microvesículas bacterianas tanto en la respuesta inmune innata como en la adaptativa. Reforzando así el uso de las MVs bacterianas como excelentes inmunógenos en la formulación de biológicos que prevengan y controlen enfermedades como la Mannheimiosis Neumónica, en nuestro país.