En este proyecto se plantea la crioconservación de semen de equino sometido a dos tratamientos de enfriado precongelación, empleando un diluyente estándar de congelación. La hipótesis a probar es que el enfriado lento desde temperatura de cuarto hasta llegar a -5ºC en lugar de +5ºC antes de la congelación, permitirá que la membrana plasmática de los espermatozoides atraviese una zona crítica de temperatura donde probablemente ocurra una transición de fase de los lípidos de la bicapa, favoreciendo así el rearreglo de la membrana y la supervivencia de los espermatozoides. Se sabe que existe un rango de temperatura,20 a 0°C, en el que ocurre la transición de fase de los lípidos de la bicapa de la membrana plasmática, del estado líquido cristalino al estado de gel, provocando que la membrana se vuelva rígida y en consecuencia que se reduzca su capacidad para manejar los cambios de volumen asociados al proceso de crioconservación. Sin embargo, parece ser que existe otro rango de temperatura que está alrededor de 0ºC donde puede ocurrir alguna transición de fase extra; se desconoce si esto es cierto en espermatozoides de mamífero. Las variables que se evaluarán en el semen fresco serán el volumen obtenido, la concentración de espermatozoides, la motilidad progresiva, la integridad de la membrana plasmática y la acrosomal, la cantidad y tipo de las morfoanomalias, y el estado de capacitación. Además, al descongelado se evaluará la capacidad de los espermatozoides para llevar a cabo la reacción acrosomal previa incubación en condiciones que favorecen la capacitación espermática: sustitución del medio de congelación por medio TALP, atmosfera de CO2, adición de progesterona. Para realizar la evaluación de las variables mencionadas se empleará una batería de compuestos fluorescentes y no fluorescentes cuyos protocolos se han adaptado a los espermatozoides de equino. Se trabajará con al menos cinco machos y cinco eyaculados de cada uno, esto ayudará a observar la variabilidad entre individuos al proceso de criopreservación.

La congelación del semen por tiempo indefinido es el mejor medio para la conservación del germoplasma tanto en especies animales de importancia comercial como en aquellas con un valor cultural inherente. La conservación adecuada del germoplasma permite la preservación de la diversidad genética, cruzamientos más eficientes y disponer de una reserva en caso de pérdida de germoplasma por epidemias o accidentes naturales. La crioconservación de los espermatozoides de equino ofrece un medio efectivo para el almacenamiento a largo plazo de material genético importante; este método elimina la dificultad asociada con el transporte de animales o del semen fresco a grandes distancias o por largos periodos de tiempo. Con los protocolos actuales de crioconservación, aproximadamente el 50% de los espermatozoides de cualquier especie sobrevive a estos procedimientos, la inseminación artificial con espermatozoides congelados - descongelados da como resultado una baja de la fertilidad. La identificación de animales “buenos” congeladores tendría un efecto favorable sobre los métodos de conservación de semen en la industria de la inseminación artificial, promoviendo la crioconservación como una opción viable para la inseminación artificial equina; sin embargo, es deseable disponer de protocolos de crioconservación adaptados a los “malos” congeladores para así conservar el semen de cualquier individuo y mantener la diversidad genética. _x000D_ El conocimiento de las diferencias que determinan que un individuo sea “bueno o malo congelador” permitirá, eventualmente, la modificación de las propiedades de las células (fluidez de la membrana) para su óptima criosupervivencia. Considerando lo anterior, este proyecto contribuirá al conocimiento de la fisiología de las células sometidas a cambios de temperatura, a la formación de recursos humanos en esta disciplina y finalmente al progreso de la industria equina.