Síntesis_x000D_ _x000D_ El avance tecnológico ha permitido el desarrollo y optimización de sistemas automatizados de secuenciación de DNA a gran escala. En el campo de la patogénesis microbiana esta tecnología no sólo permite el análisis filogenético basado en la secuencia del RNA ribosomal de la subunidad 16 S y la variación de la resistencia antimicrobiana a nivel genético, sino el diseño de estrategias epidemiológicas útiles en la clasificación molecular y subtipificación de algunos factores de virulencia presentes en los diferentes patógenos, en especial aquellos que representan un importante problema de Salud Pública. _x000D_ El género Streptococcus está constituidos por alrededor de 20 especies, siendo Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae y Streptococcus pneumoniae las más importantes a nivel clínico. Desde 1999 hemos implementado estrategias para desarrollar un laboratorio de referencia en la caracterización de Estreptococos beta hemolíticos de importancia médica iniciando con Streptococcus pyogenes y recientemente con Streptococcus agalactiae. Entre las estrategias se contempla la detección y caracterización de genes mediante PCR, cortes de restricción, análisis de la secuencia del DNA, determinación de secuencias multilocus y patrones de resistencia a antibióticos._x000D_ La determinación de los serotipos M de S. pyogenes y capsulares de S. agalactiae en aislamientos clínicos contribuirá al conocimiento de las infecciones Estreptocócicas en México. AsÍ, la información de los serotipos M prevalentes es útil para la evaluación epidemiológica de la cobertura que tendría en nuestra población una eventual vacuna contra S. pyogenes. La identificación de los genes speA y speC se realiza por la técnica de PCR en S. pyogenes, estos genes están especialmente relacionados con cepas virulentas. _x000D_ S. pyogenes y S. agalactiae son sensible a la penicilina, sin embargo, se ha observado en diversos países un aumento en la resistencia a antibióticos del grupo de los Macrólidos como la eritromicina, lo que ha llamado la atención a diversos grupos de investigación debido a que este antibiótico es utilizado como tratamiento alternativo para las infecciones estreptocócicas. Por otro lado se han comenzado a identificar y caracterizar cepas de baja susceptibilidad a la penicilina, objetivo que pretendemos realizar en nuestra colección de aislamientos mexicanos. _x000D_ Deseamos contribuir con datos epidemiológicos sobre los niveles de susceptibilidad antimicrobiana de S. pyogenes y S. agalactiae asociados a la resistencia en nuestro país, debido a que son muy pocos los estudios que relacionan los serotipos de S. pyogenes y S. agalactiae con los genes asociados a la resistencia antimicrobiana para cada uno de ellos. El impacto potencial que esta investigación puede generar en el campo son: describir la epidemiología de las cepas de S. pyogenes y S. agalactiae involucradas en diferentes procesos infecciosos causados por estas bacteria,s incluyendo la prevalencia de la resistencia en México a eritromicina y otros siete antibióticos entre ellos a la penicilina. Las estrategias moleculares desarrolladas podrán ser transferidas a los laboratorios clínicos que deseen incursionar en la caracterización molecular, así como probar y establecer medios de cultivo para el primo aislamiento de la bacteria. Dichos reactivos pueden ser comercializables y ser utilizados en laboratorios donde la serología no es accesible o en la búsqueda de serotipos específicos de importancia clínica. Gracias a la experiencia y establecimiento de relaciones con otros investigadores participaremos en dos cursos especializados en bacteriología y uso de técnicas moleculares en la clínica. Como productos de investigación nos proponemos la publicación de dos artículos de difusión internacional, así como la publicación de las secuencias generadas en los bancos electrónicos de genes con el fin de favorecer el acceso para que otros investigadores puedan comparar sus secuencias, realizar análisis y estudios adicionales._x000D_

2) CONTRIBUCIÓN DEL PROYECTO_x000D_ _x000D_ -La determinación de los serotipos M de S. pyogenes y capsulares de S. agalactiae en aislamientos clínicos contribuirá al conocimiento de las infecciones Estreptocócicas en México. _x000D_ _x000D_ -Conocer los tipos M prevalentes genera información epidemiológica útil para la evaluación de la cobertura que tendría en nuestra población una eventual vacuna de S. pyogenes (en estudios clínicos)._x000D_ _x000D_ -Nuestro grupo en colaboración con el Dr. J. Musser describió la variación alélica del gen sic, por lo que representa un especial interés continuar con el estudio epidemiológico en aislamientos mexicanos del serotipo M1(9,20). Datos preliminares han encontrado alelos nuevos del gen emm1 y sic en algunas cepas Mexicanas por lo que es de interés mostrar si hay restricción geográfica de estos alelos que tienen impacto en la secuencia de la proteína y su implicación en la patogénesis del Estreptococo(24)._x000D_ _x000D_ -Contribuir con datos epidemiológicos sobre los niveles de susceptibilidad antimicrobiana de S. pyogenes y S. agalactiae asociados a la resistencia en nuestro país. Existen pocos estudios que relacionen los serotipos de S. pyogenes y S. agalactiae con los genes asociados a la resistencia antimicrobiana para cada uno de ellos._x000D_ _x000D_ -Confirmar nuestras observaciones preliminares sobre la diferencia en los niveles de susceptibilidad a penicilina que presentan las cepas de S. pyogenes y S. agalactiae y analizar las cepas de baja susceptibilidad para identificación del mecanismo que contribuye a esta baja susceptibilidad a antibiótico._x000D_ _x000D_ -Contribuir al desarrollo de medios de cultivo que favorezcan la recuperación de S. pyogenes a partir de exudados faringeos estos medios ser probados en paralelo con los medios tradicionales por los laboratorios que participan en el proyecto._x000D_ _x000D_ -Contar con datos epidemiológicos sobre los cambios en los tipos capsulares de S. agalactiae y los factores de virulencia asociados a estos en cepas Mexicanas._x000D_ _x000D_ -Consolidar el reconocimiento de un laboratorio especializado en la caracterización molecular de Streptococcus pyogenes y Streptococcus agalactiae._x000D_