Los organismos vivos desencadenar mecanismos defensivos ante el ataque de patógenos. Diferentes moléculas actúan como señales, que al ser percibidas inducen diferentes respuestas entre las cuales está la muerte controlada de una población celular logrando así detener el avance del patógeno. Sin embargo y en el caso de que las defensas no sean suficientes, la muerte se desregula y se propaga a todo el organismo._x000D_ El interés de realizar este proyecto es el de conocer el mecanismo de muerte celular que se desarrolla en la interacción entre la bacteria entomopatógena Bacillus thuringiensis (Bt) y las células del intestino de las larvas de insectos blanco como Manduca sexta y Anopheles gambie._x000D_ Las toxinas Cry forman parte de las toxinas formadoras de poro (TFP), que producen algunas bacterias para matar a la célula eucariota mediante la formación de poros en su membrana celular. La ruptura celular libera los nutrientes que la bacteria emplea para su desarrollo. Junto con la formación de poro, las TFP desencadenan señales intra-celulares, que inician la defensa de la célula y/o son utilizados por la bacteria para invadir exitosamente a su blanco. Algunos de los mecanismos de defensa descritos para otras TFP involucran procesos de muerte celular como la apoptosis, la piroptosis y la autofagia. En este proyecto proponemos analizar si las toxinas de Bt inducen muerte celular la cual analizaremos usando protocolos establecidos para este fin como tinción de células vivas y muertas, medición de lactato deshidrogenasa, escaleras de DNA y Tunel (DNA in situ nick end-labeling). Después analizaremos que tipo de muerte celular que desencadenan las toxinas Cry en las células de los insectos blanco, para lo cual analizaremos la expresión de genes que caracterizan a los tres tipos de muerte celular mencionados arriba: para apoptosis analizaremos caspasa-3, para piroptosis, caspasa-1 y para autofagia ATG6/Beclina. Una vez que conozcamos que marcador de las diferentes muertes es el que inducen las toxinas Cry, lo inactivaremos con técnicas de RNA interferente para profundizar en el análisis de su función en la toxicidad de las toxinas Cry. _x000D_ El conocimiento detallado del proceso de muerte desencadenado por la toxina Cry en las células del intestino del insecto blanco, generará conocimiento que nos permitirá entender los mecanismos que se disparan en respuesta a la presencia de la toxina Cry en las células blanco. Con este conocimiento pretendemos diseñar estrategias para mejorar la toxicidad y para evitar resistencia a las toxinas Cry._x000D_ _x000D_

Se desconoce si las toxinas Cry de BT desencadena apoptosis o piroptosis. El conocimiento básico del proceso de señalización que desencadenan estas toxinas durante la muerte de las células blanco de las larvas, facilitará el diseño de estrategias adecuadas para emplearlas como bioinsecticidas _x000D_