Se propone establecer un método reproducible para la transfección de genes heterólogos en cisticercos enteros y(ó) células germinales de Taenia crassiceps. Se utilizarán cisticercos de T. crassiceps, ya que se trata de un organismo parásito genéticamente homogéneo, que se mantiene fácilmente en el laboratorio a través de transferencia del peritoneo de un ratón infectado hacia el de otro receptor, que se ha convertido en un modelo ampliamente utilizado para el estudio de la cisticercosis humana y porcina. Esta enfermedad todavía constituye un problema de salud humana y de economía en la producción de carne de cerdo en México y de muchos otros países en vías de desarrollo._x000D_ Desde hace años se ha avanzado en la transfección de genes en diversas células eucarióticas, incluyendo algunas obtenidas de organismos parásitos. En el caso de los cestodos, grupo al que pertenece la T. crassiceps, los estudios son escasos. Sólo existe un reporte muy limitado en resultados, en el que se intentó transfectar células germinales de Echinococcus multicularis. _x000D_ Una de las razones para explicar porqué no se ha logrado la transfección en parásitos cestodos, es la naturaleza sincicial de sus tejidos, lo que ha limitado el desarrollo de líneas celulares susceptibles de transfección y cultivo in vitro. Nosotros aprovecharemos una experiencia previa de nuestro grupo para el aislamiento de células germinales que pueden regenerar el cisticerco entero, cuando se inoculan en la cavidad peritoneal de un ratón. Además, intentaremos una estrategia de transfección de cisticercos enteros, seguida por una selección de las células transfectadas, basada en una resistencia a antibióticos (neomicina) que también hemos caracterizado previamente para este parásito._x000D_ Para la transfección, utilizaremos varias técnicas: lipofección, electroporación y bombardeo de partículas. Para la electroporación se probará un nuevo equipo que ha mostrado tener gran eficacia en la transfección de células de mamíferos. Para cada método se llevará a cabo pruebas sistemáticas hasta encontrar las condiciones adecuadas. Como vector se tiene contemplado utilizar un plásmido que contiene promotores, genes reporteros y de selección, adecuados para su propagación en bacteria, así como para las pruebas de expresión en células eucarióticas._x000D_ Para llevar a cabo el proyecto se cuenta con un grupo de investigadores con experiencia en diversas disciplinas: biología del parásito, biología molecular y transfección génica en organismos eucarióticos, lo que permitirá obtener resultados que cumplan de manera satisfactoria el objetivo de trabajo. El proyecto también contribuirá a la formación de recursos humanos a través de un estudiante doctoral directamente involucrado en el proyecto y otro que se relaciona indirectamente. _x000D_ Los resultados obtenidos tendrán un impacto considerable en el campo de las enfermedades parasitarias y en particular de los helmintos. Por un lado, abrirá nuevas posibilidades en la caracterización de genes para los cuales no se conoce su función, muchos de ellos específicos de este grupo de parásitos. Contribuirá a mejorar nuestra comprensión de los mecanismos de regulación génica en cestodos y abrirá las puertas a intentos de manipulación que pueden encontrar aplicación en procesos veterinarios de vacunación._x000D_

Establecer un procedimiento reproducible para la transfección en parásitos Taénidos es un objetivo largamente codiciado en el campo, ya que tendría una considerable repercusión para aumentar el conocimiento biológico de este grupo de parásitos. Por ejemplo, se abrirían nuevas avenidas para caracterizar muchos genes de función desconocida y para entender los mecanismos de regulación de la expresión génica. Como se mencionó antes, el proyecto del genoma de T. solium ha mostrado que al menos la mitad de los genes secuenciados no encuentran homología con genes de otros organismos en bases de datos públicas. Adicionalmente, la obtención de cisticercos transfectados con genes heterólogos activos permitiría ensayar el uso de estos parásitos, que establecen relaciones extraordinariamente estables con sus huéspedes, como vehículos para la expresión de antígenos vacunales en contra de otras enfermedades. Por otro lado, el proyecto contribuirá a la formación de recursos humanos ya que es el proyecto doctoral de la estudiante Bárbara Beatriz Moguel Rodríguez, quien se encuentra inscrita en el programa de Posgrado en Ciencias Biológicas._x000D_ A pesar de que las transfecciones se han implementado desde hace un tiempo en diferentes organismos, incluyendo células de mamíferos, el avance en células de parásitos helmintos es moderado [38]. El avance es particularmente limitado en el caso de los gusanos planos o Platyhelminthes, y en especial de los céstodos. Además, una variedad de estudios experimentales se han visto limitados por carecer de líneas celulares y métodos de análisis para genética molecular [40]. En el presente proyecto, pretendemos conjuntar el avance en las herramientas para introducir DNA heterólogo, con el avance en la manipulación de células germinales en cisticercos de T. crassiceps, este último avance logrado en nuestro grupo. _x000D_ La elección de T. crassiceps para este proyecto de transfección, obedece no solo a la facilidad con que se mantienen los cisticercos en condiciones de laboratorio. Obedece también a la posibilidad de utilizar organismos genéticamente homogéneos, ya que al propagarlos, se obtienen poblaciones clonales. Los huéspedes mamíferos (ratones) en los que se propagan también son homogéneos genéticamente, lo cual reduce la diversidad entre individuos (entre huéspedes y parásitos), y por ende, la variabilidad de los resultados experimentales. Finalmente, en experiencias previas de nuestro grupo, fue posible obtener células germinales capaces de regenerar cisticercos completos mediante cultivo in vitro. En caso de lograr la transfección de estas células germinales, será posible obtener cisticercos totalmente transgénicos._x000D_