Síntesis del proyecto El epitelio ovárico superficial (OSE) es una monocapa que recubre al ovario, su fisiología es muy dinámica pues cambia constantemente durante el ciclo folicular, durante la ovulación sufre apoptosis, diferenciación y proliferación, procesos que lo hacen un tejido susceptible del surgimiento de neoplasias. Datos epidemiológicos ponen de manifiesto la importancia del estudio de la fisiología celular del OSE, pues el 90% de los cánceres de ovario se originan en este tejido. Los receptores P2 se agrupan en dos familias, de acuerdo a su estructura molecular y a su mecanismo de acción: P2Y, que son receptores acoplados a proteínas G, y P2X que son canales catiónicos no selectivos (Ralevic y Burnstock, 1998). La activación de receptores P2 regula varios procesos celulares, por ejemplo, la activación del receptor canal P2X7 induce muerte celular, se ha propuesto que en su conformación activa el receptor se asocia con la panexina 1 (Pelegrin y Surprenant, 2006) para formar una estructura denominada el megaporo, permeable a moléculas de hasta 1 kDa, en este estado el receptor no se desensibiliza y los niveles elevados y sostenidos de Ca2+ intracelular activan la maquinaria apoptótica (Burnstock, 2007). Es importante señalar que el receptor P2X7 ha sido estudiado en cáncer de cervix, pues en el epitelio uterino regula la inducción constitutiva de muerte celular apoptótica y en procesos de cáncer su nivel de expresión disminuye significativamente, siendo considerado como un biomarcador de células epiteliales con procesos neoplásicos (Li et al., 2006). En estudios recientes de nuestro laboratorio hemos explorado la expresión de receptores P2 en el ovario de mamífero por métodos de inmunohistoquímica, como resultado de estos trabajos se evidenció la expresión del canal P2X7 en las células de la teca folicular y en el epitelio ovárico superficial (OSE). Profundizando en algunas de estas observaciones, caracterizamos respuestas celulares a la activación de receptores P2X7 en células de la teca folicular (Vázquez-Cuevas et al., 2006); particularmente mostramos que, en este tipo celular, pueden movilizar Ca2+ al interior de la célula e inducir muerte celular apoptótica. Por otra parte en el OSE describimos además del canal P2X7 al P2X4 y al P2Y2; estas primeras observaciones sugieren que los receptores P2 son relevantes en fisiología de este tejido, sin embargo es necesario confirmar y profundizar estos hallazgos. La información disponible sobre el papel del sistema purinérgico en el OSE es limitada. Estudios realizados en líneas celulares humanas preneoplásicas (IOSE29) y neoplásicas (IOSE-29EC y OVCAR3) de OSE, han mostrado la expresión endógena del receptor P2Y2 (anteriormente llamado P2U) en las tres líneas celulares. La estimulación de estos receptores con ATP induce proliferación celular posiblemente a través de la activación de las MAPK p42 y p44 (ERKs) por la proteína cinasa C (Choi et al., 2003). No existe información referente a la expresión de receptores P2X en el OSE. Nuestra propuesta es hacer una descripción detallada de receptores purinérgicos en las células del epitelio ovárico superficial, estructuras de gran relevancia en el surgimiento de procesos neoplásicos (Scully, 1995; Wong y Leung, 2007; Deligdisch et al., 1995; Fleming et al., 2007). Utilizaremos métodos de biología molecular como RT-PCR, clonación y secuenciación para identificar los transcritos que se expresan en este tejido, para definir su presencia en la membrana celular realizaremos marcaje de fotoafinidad con radioligados con esta misma estrategia evaluaremos la especificidad del marcaje compitiendo contra concentraciones elevadas de ligandos específicos contra cada receptor. Finalmente, los análisis funcionales se realizarán por registros in vivo de Ca2+ intracelular utilizando microscopía de fluorescencia. El conjunto de datos generados como conocimiento básico servirán para fundamentar otros estudios a nivel de la fisiología ovárica. Nuestra hipótesis general es que este sistema de neurotransmisión puede ejercer mecanismos de regulación adicionales o modular la comunicación dependiente de las hormonas gonadotropicas y/o esteroideas. El estudio de la comunicación purinérgica en las células ováricas es una línea de estudio iniciada recientemente, los posibles hallazgos que se obtendrán del desarrollo del presente proyecto, aportarán nuevos conceptos en la regulación de la función ovárica por neurotransmisores y en general de la biología de los receptores purinérgicos en sistemas fisiológicos, específicamente en el epitelio ovárico superficial.

Contribución del proyecto La regulación de la fisiología celular de las células del epitelio ovárico superficial por neurotransmisores es un campo de investigación someramente estudiado. Sin embargo, la importancia de este tejido en el surgimiento de procesos neoplásicos en el ovario es fundamental (Wong y Leung , 2007). El estudio detallado de la expresión de receptores purinérgicos del tipo P2 contribuirá con conocimientos básicos de la regulación fisiológica de este tejido por ATP extracelular; permitiéndonos conocer la diversidad de respuestas y procesos celulares que esta molécula puede regular. En este contexto cabe resaltar que uno de los receptores que mayor interés generan para este estudio, el receptor P2X7 ha sido relacionado con neoplasias en el epitelio uterino (Li et al., 2006), conocer con detalle los receptores de este tipo que se expresan en tejidos susceptibles de transformación , como es el caso del OSE, abrirá nuevas líneas de investigación sobre su potencial como nuevos blancos terapéuticos. Así mismo sentará las bases para el estudio integrativo con otras señales que regulan la fisiología ovárica, por ejemplo, el sistema de hormonas gonadotrópicas, que permitirá comprender la regulación cruzada que existe entre varias vías de información celular y la regulación fina de la fisiología ovárica.